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大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是指在人工條件下(設(shè)定ph、溫度、溶氧等),在細(xì)胞生物反應(yīng)器中高密度大量培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞用于生產(chǎn)生物制品的技術(shù)。目前可大規(guī)模培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞已成功生產(chǎn)了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、紅細(xì)胞生成素、單克隆抗體等產(chǎn)品。該技術(shù)經(jīng)有了很大發(fā)展,從使用轉(zhuǎn)瓶(rollerbottle)、CellCube等貼壁細(xì)胞培養(yǎng),發(fā)展為生物反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)。
一種細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)——細(xì)胞工廠,在疫苗行業(yè)已逐漸普及。這項(xiàng)技術(shù)擁有能降低污染風(fēng)險(xiǎn),節(jié)省空間,表面有利于細(xì)胞貼附和生長,能較好的替代傳統(tǒng)轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn),一定程度上彌補(bǔ)了之前技術(shù)的問題。
當(dāng)然如何通過細(xì)胞工廠保持每一次操作的安全、一致、無污染,是需要重點(diǎn)考慮的問題。那么我們應(yīng)該如何正確的操作細(xì)胞工廠呢?接下來,康寧3D細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)小編帶大家了解具體的操作流程。
由于細(xì)胞工廠的培養(yǎng)特性,放大的最簡單方式就是增加細(xì)胞工廠的數(shù)量。當(dāng)細(xì)胞工廠數(shù)量增多時(shí),我們就會(huì)遇到與使用細(xì)胞瓶培養(yǎng)時(shí)一樣的麻煩——多次的開蓋操作。隨著開蓋次數(shù)的增加,操作的時(shí)間會(huì)延長,污染的風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)隨之增高。為了解決這個(gè)問題,就可以用到一個(gè)很簡單的方式,將細(xì)胞工廠從單個(gè)的單位組成一組,并且將開放的培養(yǎng)組件組合成一個(gè)密閉的系統(tǒng)。
1.準(zhǔn)備定制傳液蓋、培養(yǎng)基、細(xì)胞工廠、連接管路。
2.將傳液蓋與培養(yǎng)基瓶、細(xì)胞工廠與連接管路在A級環(huán)境下連接。
3.將傳液蓋與連接管路通過快接口連接,組成封閉系統(tǒng)。
4.進(jìn)行傳液操作,傳液結(jié)束后,連接管路可以保留在細(xì)胞工廠上進(jìn)行培養(yǎng),以及供下一步的換液與傳代操作使用。
1.變開放系統(tǒng)為密閉系統(tǒng),降低污染風(fēng)險(xiǎn)
相信大家也組裝過簡單的管路用于培養(yǎng)基及其他緩沖液的傳輸,使用管路操作最顯著的優(yōu)點(diǎn)就是將細(xì)胞工廠的開放操作變?yōu)榱嗣荛]操作。培養(yǎng)基不在經(jīng)過開放的環(huán)境,這樣就能大大降低外界污染的風(fēng)險(xiǎn),培養(yǎng)基瓶也可以通過定制的傳液蓋,在超凈臺中組裝后與管路系統(tǒng)連接,實(shí)現(xiàn)密閉的傳液。
在使用單個(gè)管路連接細(xì)胞工廠時(shí),過高的進(jìn)液速度會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞工廠的承受的壓力增加,導(dǎo)致細(xì)胞工廠出現(xiàn)異響或者炸裂。這些壓力是由于快速的液體流入,氣體無法順利排出導(dǎo)致的。一般來說,單個(gè)細(xì)胞工廠在不使用濾器改善通氣條件的情況下。目前大家推薦的進(jìn)液速度為3-4L/min。這樣當(dāng)大家使用管路將多個(gè)細(xì)胞工廠串聯(lián)的時(shí)候,由于多個(gè)細(xì)胞工廠可以分擔(dān)氣體排出的壓力,進(jìn)液速度可以成倍增加,4個(gè)細(xì)胞工廠串聯(lián)可以做到10-12/min的進(jìn)液速度。這時(shí)進(jìn)液就不再是操作的瓶頸了。
常規(guī)的由小試向中試階段過渡的操作可能在超凈臺中進(jìn)行。在大生產(chǎn)的車間中,大家可能使用溫室,定制的架子,或使用自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行操作。無論使用哪種布局方式,或者一次連接幾個(gè)細(xì)胞工廠,目前的技術(shù)都可以根據(jù)需求,定制不同的連接方案,與不同的工藝緊密契合。
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標(biāo)題:大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)該如何高效進(jìn)行?
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